血浆dna
已回复问题分析:1 吸20ul蛋白酶K加入2.0ml微量离心管底部。2 加入200ul待提取的样品于微量离心管中。3 加入200ul Buffer AL缓冲液于离心管中,旋涡15秒。4 放入56℃水浴10分钟5 离心5秒钟,以便离下附于管壁上的水珠。6 加入200ul无水乙醇于离心管中,旋涡混匀15秒后,短暂离心。7 小心地将上述混合液加入QIAamp管柱中,尽量不要溅到管壁四周并在下套一个2ml收集管,盖紧管帽后离心1分钟(6000g,8000转/分),然后丢弃下面的收集管,重新套上一个新的收集管。8 加入500ul BufferAW1缓冲液于QIAmp管柱中,尽量不要碰到管壁,盖紧管帽后离心1分钟(6000g,8000转/分),然后丢弃下面的收集管,重新套上一个新的收集管9 加入500ul BufferAW2缓冲液于QIAamp管柱中,尽量不要碰到管壁,盖紧管帽后离心3分钟(14000转/分,20000g)10 丢弃下面的收集管,重新套上一个1.5ml微量离心管,最高速离心1min,以彻底除去BufferAW2。11 QIAamp管重新套上一个1.5ml微量离心管,打开QIAamp管,加入200ul BufferAE缓冲液,室温静置5分钟,然后离心1分钟(8000转/分),取下洗脱后的1.5ml微量离心管,将收集到的DNA提取液经核酸测定仪测得DNA浓度及纯度,一20℃存放备用。
问题分析:1 材料和方法 1.1 样本来源 静脉抽取30份健康体检者血样。10份用EDTA抗凝, 10份不加抗凝处理,10份不抗凝在-40 ℃冻存2 a左右。 1.2 DNA提取方法 取凝血块,用9 g/L 氯化钠匀浆大约30 s,每换一个样本都要用70%乙醇和9 g/L 氯化钠清洗匀浆器以避免交叉污染。取匀浆后样本1 ml置于离心管中,室温8 000 r离心5 min后,去掉上层。血细胞在1 ml的Tris缓冲液I(10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0;10 mmol/L 氯化钾;10 mmol/L 氯化镁;2 mmol/L EDTA,pH 8.0;25 mL/L Triton X?50)中裂解10 min, 其间轻轻用力充分混匀, 室温10 000 r离心2 min,沉淀要用Tris 缓冲液I洗2次。将沉淀用220 μl的Tris 缓冲液II (10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0;10 mmol/L 氯化钾;10 mmol/L 氯化镁;2 mmol/L EDTA,pH 8.0;0.4 mol/L 氯化钠;10 g/L SDS)悬浮,轻轻振荡试管, 使底部细胞团块散开,在56 ℃保温15 min裂解。加入50 μl 5 M 氯化钠充分振荡沉淀去除蛋白质。10 000 r离心5 min,取上清。加2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA后,10 000 r离心5 min,弃上清。室温晾20 min左右待酒精挥发干净后以适量TE缓冲液(10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0,1 mmol/L EDTA)回溶。EDTA抗凝血中DNA的提取从去掉上层开始。 1. 3 DNA浓度检测 用分光光度计在260 nm测DNA浓度。 1. 4 DNA纯度检测 DNA的纯度用A260/A280比值表示[3]。结果以均值±SD表示。 1. 5 DNA分子量检测 DNA样本的完整性用0.7%琼脂糖凝胶电泳证实,溴化乙锭染色,紫外灯观察。 1. 6 PCR检测 PCR扩增组织型纤溶酶原激活因子(t?PA)第8内含子Alu等位基因插入(I)和缺失(D)二态性[6]来评价DNA的可靠性。PCR引物序列如下:Alu1 5'?GTA AGA GTT CCG TAA CAG GAC AGC T?3', Alu2 5'?CCC CAC CCT AGG AGA ACT TCT CTT T?3'。反应体系组成为:10×PCR buffer 5 μl , 25 mM 氯化镁 6 μl , 10 mM each dNTPs 1 μl , 10 μM primer上下游各1 μl , DNA 2 μl ,Taq酶1 μl 。PCR反应程序为:95 ℃5 min预变性,然后94 ℃ 1 min ,58 ℃ 1 min,72 ℃ 2 min循环40次,在72 ℃充分延伸10 min。 1. 7 结果 以均值±SD表示。
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石家庄京科中医皮肤病医院
石家庄京科中医皮肤病医院位于石家庄市华星路9号,紧邻火车站,地理位置优越,交通便利,是一所集医疗、保健、体检为一体的现代化综合性医院。石家庄京科医院作为市医保定点单位,合理透明的收费制度,深受患者认可,一切以患者为中心、一切以质量为核心,服务于民,为大众健康保驾护航。
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许昌德医堂皮肤病医院
治皮肤,祛胎记,解决面部皮肤难题一一一许昌德医堂皮肤病医院,七大专病门诊,二十多项特色疗法,做有温度,专业化,一站式的皮肤科 许昌德医堂为许昌市皮肤病研究所,建院伊始,先后与北京空总,北京301,湘雅医学院,上海二军大,省医等皮肤病专家建立协作关系,先后创建了白癜风特色诊疗中心,牛皮癣特色诊疗中心,胎记血管瘤特色诊疗中心、痤疮疤痕特色治疗中心及静脉曲张特色诊疗中心,面部问题修复中心等特色专业科室,并先后研发引进`308激光治疗系统,“血管瘤无创介入治疗技术”、多维胎记分解治疗技术、美中互利595染料激光, 科英调Q激光等一大批国际先进的白癜风,牛皮癣,胎记、血管瘤、疤痕治疗技术和尖端设备,在治疗白癜风,黑色胎记(太田痣、先天性色素痣等)、红胎记(鲜红斑痣等)、血管瘤、咖啡斑、雀斑、黄褐斑、毛痣、祛纹身等皮肤色素性、血管性病变方面取得了显著的疗效,并通过北京,上海,省医的皮肤专家定期会诊,让中原的患者在许昌就可亨受到全国知名专家的诊疗服务,获得良好的口碑 厚德载物、医者仁心”医患几分钟,患者一辈子",德医堂会专心,细心,贴心,扫白打黑祛红除疤,还您健康皮肤!
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南昌市第十二医院
南昌市第十二医院诊疗设备先进,努力为人民群众提供方便快捷、优质高效、安全放心的医疗服务。专科专家云集、服务方便快捷、质量安全第一、注重人文关怀、平价合理收费和实现可持续发展是全院医务人员的不懈追求,医院秉承“患者至上,医德至上,服务至诚”的医疗精神,致力于成为一家技术力量雄厚、人才结构合理、专业特色突出,全面发展的综合性医院。
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合肥白癜风医院
合肥华夏白癜风医院是一家以难治性白癜风为诊疗对象的专业医院,坐落于合肥市铜陵路与合裕路交叉口东北角(天成大厦旁),在白癜风的预防、保健、诊疗方面形成了自己独特的治疗优势及特色治疗理念。
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成都白癜风医院
"成都西部白癜风医院,是西南地区大型的专业白癜风医院,多年来一直致力于白癜风的临床诊疗与研究,是一家专注于白癜风诊断、治疗、预防的现代化医疗机构。“真正将先进的医疗科技运用于临床,致力于为实现大众更健康优质的生活创造一切可能”作为办院宗旨,成都西部白癜风医院坚持以优质的医术、完善的医疗体系和诚信的服务打造“白癜风诊疗品牌”。 医院下设白癜风专家门诊、医学检验科、中西药房、光疗室、渗透室、无针注射室、住院部等科室,严格按照中华医学会认定的诊疗标准,并制定严格的诊疗临床路径,坚持“患者为本,疗效为先”的服务理念,坚持以卓越的医疗体系服务患者。 技术是核心推动力 作为一家不断追求卓越的专业白癜风医院,成都西部白癜风医院先后引进先进白癜风诊疗设备和仪器,如美国新一代(XTRAC Velocity 400i)308nm准分子激光治疗系统、美国三维皮肤CT检测仪、NB-UVB311治疗系统、超脉冲二氧化碳激光治疗仪等,为患者的就诊提供了强有力的科学数据支持和硬件保证,提高了白癜风疾病病因检测的准确性及疾病治疗的高效性,为白癜风患者的临床诊疗提供了更科学、更安全的全方位保障。 医院坚持中西医结合,因病制宜,使中医精华、西医先进技术及现代化设备达到优势互补、完美结合。目前能开展多项白癜风诊疗技术,如美国三维皮肤CT检测、美国新一代(XTRAC Velocity 400i)308nm准分子激光治疗、NB-UVB311治疗、超脉冲黑素激活疗法、无针注射疗法、白癜风表皮移植、中药熏蒸、中医药浴等。 医师力量是治疗的基石 成都西部白癜风医院拥有一支白癜风诊疗领域多年临床经验的专家团队,骨干人员先后赴各知名皮肤病、白癜风科研机构进修深造,具有多年实际临床工作经验。白癜风专家门诊由冯家新主任、刘淑芸主任、敬代秀主任、王艳琼主任等多位川内知名专家坐镇,联合其他医疗医技专业人才形成了成都西部白癜风医院专家团队,能在较快时间内对各类白癜风进行诊断,并提供优化、有效、经济的治疗方案。 此外,医院在积极引进人才的同时,还十分注重自身人才的培养和对外交流,联合国内外多个科研机构,广泛开展技术合作,全心构筑一个国际化、高层次的医学人才高地。 多年来,医院大力开展白癜风疾病的防治与研究,在提高常见及难治型白癜风诊疗水平、白癜风诊疗新技术临床运用、培训白癜风专业技术人才等方面,取得了较好成绩,受到医疗同行的认可和赞誉。目前,成都西部白癜风医院已发展成为一座集诊断、治疗和预防于一体的白癜风专业诊疗机构。"
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北京国丹白癜风医院
北京白癜风医院是集预防、保健、诊疗为一体的现代化三级白癜风专科医院,医院秉承“厚德、感恩、创新、引领”的院训,始终坚持“一切以患者为中心”以及“爱,就在您身边”的人文服务理念。
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许昌白癜风医院
许昌白癜风医院是一家经当地卫生部门批准的专业的许昌白癜风医院,多年来专注白癜风疾病为众多患者解决疾病带来的困扰,是一家深受当地百姓信赖的许昌白癜风专科医院。许昌白癜风医院部位于许昌,是一所白癜风诊疗医院,为白癜风患者健康服务。
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重庆白癜风医院
重庆白癜风医院是一家经当地卫生部门批准的专业的重庆白癜风医院,多年来专注白癜风疾病为众多患者解决疾病带来的困扰,是一家深受当地百姓信赖的重庆白癜风专科医院。重庆白癜风医院部位于重庆,是一所白癜风诊疗医院,为白癜风患者健康服务。
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郑州白癜风医院
郑州白癜风医院是一家经当地卫生部门批准的专业的郑州白癜风医院,多年来专注白癜风疾病为众多患者解决疾病带来的困扰,是一家深受当地百姓信赖的郑州白癜风专科医院。郑州白癜风医院部位于郑州,是一所白癜风诊疗医院,为白癜风患者健康服务。
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长沙白癜风医院
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长春白癜风医院
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西安白癜风医院
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太原白癜风医院
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石家庄白癜风医院
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沈阳白癜风医院
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上海白癜风医院
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南京白癜风医院
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南昌白癜风医院
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兰州白癜风医院
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昆明白癜风医院
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济南白癜风医院
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呼和浩特白癜风医院
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海口白癜风医院
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哈尔滨白癜风医院
哈尔滨白癜风医院是一家经当地卫生部门批准的专业的哈尔滨白癜风医院,多年来专注白癜风疾病为众多患者解决疾病带来的困扰,是一家深受当地百姓信赖的哈尔滨白癜风专科医院。哈尔滨白癜风医院部位于哈尔滨,是一所白癜风诊疗医院,为白癜风患者健康服务。
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贵阳白癜风医院
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广州白癜风医院
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福州白癜风医院
福州白癜风医院是一家经当地卫生部门批准的专业的福州白癜风医院,多年来专注白癜风疾病为众多患者解决疾病带来的困扰,是一家深受当地百姓信赖的福州白癜风专科医院。福州白癜风医院部位于福州,是一所白癜风诊疗医院,为白癜风患者健康服务。